1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
猪丹毒(swine erysipelas)，是由猪丹毒杆菌引起的一种人畜共患的急性、热性传染病，它可以通过口鼻、粪便进行传播[1], 人感染后表现为类丹毒症状，猪感染后主要特征表现为高热、急性败血症、皮肤疹块、慢性疣状心内膜炎及多发性非化脓性关节炎[2]，给人类健康和畜牧业带来极大的危害。上世纪八十年代以前，猪丹毒曾在我国各地养猪地区普遍流行，后来随着对猪病防治水平的提高一度得到有效的控制[3]，然而近几年，由于我国畜牧业广泛使用抗生素导致细菌的耐药性普遍增强，猪丹毒在我国死灰复燃，给我国养猪业造成了巨大的经济损失[4]。其广泛流行不仅在我国出现，资料显示，从2009年开始，日本猪丹毒发病率也呈逐年上升趋势[5]。目前，丹毒的流行呈世界范围扩大趋势。
目前，我国使用的猪丹毒疫苗主要是猪丹毒灭活疫苗和猪丹毒弱毒疫苗[6]。灭活疫苗多为甲醛灭活疫苗，灭活疫苗不会受母源抗体的干扰，不会引起毒力返强，相对比较安全。但是相对于弱毒疫苗，灭活疫苗接种剂量相对要求比较大，且弱毒疫苗产生效果快，所需剂量小[7]。
甲醛灭活的原理是甲醛能使微生物的蛋白质、核酸变性从而导致细菌死亡却不明显影响其免疫原性，然而，甲醛也有可能破坏部分抗原从而影响免疫效果。而吖啶橙多作为一种核酸染料鉴别病原菌[8]，它可与细胞中DNA、RNA结合，从而杀死细菌却不影响其免疫原性，目前关于吖啶橙作为灭活剂灭活细菌还没有相关报道。另外，实验室常用高压消毒，却没有相关资料显示高压灭活细菌后其免疫原性及作为一种灭活方法是否有免疫效果。另外有研究发现，猪丹毒的保护性抗原也会存在于它的培养液上清中[9]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：实验通过比较不同形式的猪丹毒菌苗的免疫特性研究，从期寻找一种最安全、效果最佳的猪丹毒疫苗。
研究内容：本实验分为灭活疫苗组、弱毒疫苗组和对照组，其中灭活疫苗组包括用甲醛灭活、吖啶橙灭活及高压浸出物、丹毒菌沉淀取上清四种方法灭活细菌，除灭活剂不同外，丹毒菌株来源、细菌数、注射量等其他因素都保持一致。其中弱毒疫苗使用的是实验室致弱菌株。
一、实验准备
3. 研究的方法与方案
4. 研究创新点
1.目前使用的灭活疫苗多是用甲醛灭活，而甲醛灭活也有可能破坏部分抗原从而影响免疫效果。实验采用的吖啶橙多作为一种核酸染料鉴别病原菌，它可与细胞中DNA、RNA结合，从而能杀死细菌却不影响其免疫原性，但目前关于吖啶橙作为灭活剂灭活细菌还没有相关报道。
2.实验室常用高压消毒灭菌，却没有相关资料显示高压灭活细菌后其免疫原性及作为一种灭活方法是否有免疫效果。使用高压后的菌液免疫小鼠观察其免疫效果也是本实验一大创新。
3.本课题采用实时荧光定量PCR检测小鼠攻毒后细胞因子，实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针，利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析，具有操作简便、快速高效，高通量，而且高敏感性等特点，能对疫苗免疫效果提供更进一步的证明。
5. 研究计划与进展
2014.2-2014.3 确定甲醛、吖啶橙灭活剂使用浓度
确定小鼠灭活疫苗和弱毒疫苗注射量、注射方式及注射菌量
2014.3-2014.5动物实验（56天）
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