1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一、本课题的意义 卵泡是雌性哺乳动物哺乳动物卵母细胞生长和发育的场所，卵巢上同时存在有大量的各级卵泡，但正常情况下仅少数能够发育至成熟排卵，绝大多数（99％以上）卵泡发生闭锁。
而随着动物胚胎生物技术（如体外受精、动物克隆）研究的不断发展，对于卵泡卵母细胞的数量需求日益增加；动物卵巢上数以百万的卵泡，即使增加较少比例的利用率，也会大大增加动物的繁殖效率。
卵母细胞体外成熟、体外受精技术发展至今，也仅能提供有限的卵源。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究的目标、内容1、以健康成年雌性小鼠为试验对象，灌服不同浓度和不同天数的淫羊藿药汤，用药后分若干时间点解剖观察和记录卵巢及卵泡发育情况，包括子宫卵巢系数、卵泡数量、最大卵泡直径等数据，得出淫羊藿对于小鼠生殖系统影响的表观数据；2、通过显微镜观察卵母细胞GVBD百分率和PBI排除率，得出淫羊藿对卵母细胞成熟的影响；3、制作石蜡切片观察和比较卵巢组织学变化，记录不同发育阶段卵泡比例以及是否排卵产生黄体，得出淫羊藿对小鼠生殖系统发育的组织学影响；4、测定灌服不同浓度雌性小鼠血液中FSH（促卵泡激素）、雌激素以及雄性小鼠体内睾酮的变化，从而判断淫羊藿对这些激素的影响，从而可以较深层次的了解淫羊藿对于生殖系统作用的机理，对于淫羊藿发挥效应的原因有所认识；5、用免疫组化方法测定LH受体、FSH受体，E2受体和P4受体，从基因水平用PCR方法测定卵泡闭锁相关基因Fas、FasL和Bcl-2表达的变化，从不同角度分析淫羊藿对小鼠卵泡发育和闭锁的调控；6、以健康雄性小鼠为实验对象，灌服不同浓度梯度的淫羊藿，解剖观察和记录不同组小鼠精子数量，活率和畸形率，判断淫羊藿对雄性小鼠生殖系统的影响；7、实验小鼠体外受精技术。
二、拟解决的关键问题1、解剖雌性小鼠取得子宫卵巢，剥离子宫卵巢上面的脂肪，对卵巢上的卵泡进行计数和最大直径的测定，这些需要我们对于小鼠的生理解剖结构有一定的认识，并且懂得卵泡的分类和计数，最大直径的测定需要用到特定的显微镜；2、知道小鼠卵母细胞培养液的配制方法，懂得取卵和捡卵操作，对小鼠卵母细胞发育各个阶段的特点要有一定的了解，能够通过显微镜观察了解发生GVBD的卵母细胞核有PBI的卵母细胞，从而能作出统计学分析；3、卵巢石蜡切片的制作与一般组织切片制作的流程有不同之处，通过参照本实验室前面的实验，从而确定切片制作流程中需要优化的地方并作改进；4、对于制作好的石蜡切片要懂得辨认分析，等定性描述其中的差异；5、测定激素含量的途径，免疫组化流程，PCR方法测定技术；6、小鼠附睾内精子数目的统计，活力的判断以及畸形率的判断。
7、小鼠的体外受精操作技术，受精卵的培养。
3. 研究的方法与方案
一、研究方法与技术路线1、子宫卵巢系数的测定要求对子宫卵巢与上面的脂肪组织分离干净，卵泡数量计数和最大直径的测定需要借助本实验室有刻度的显微镜完成，可以借鉴以前经验；2、经查阅文献，可以在3h统计GVBD百分率，12h统计PBI排除率，然后作数据统计分析；3、小鼠组织切片制作参照本实验室以前的经验，采用bouins固定液固定24h到72h。
卵泡经固定后用蒸馏水充分洗涤，滤纸擦干；梯度酒精脱水：于30%酒精、50%酒精、70%酒精、80%酒精、95%酒精各30min，无水酒精2次每次30min；然后转入二甲苯与无水酒精混合液（1:1v/v）中30min，二甲苯I液（100%二甲苯）30min、二甲苯II液（100%二甲苯）30min，至组织透明为止。
经过透明处理的卵泡依次放入以下融化石蜡液中（石蜡提前12h在恒温箱内融化）：二甲苯石蜡（1:1/v：v）浸30min，石蜡I浸40min，石蜡II液浸40min。
4. 研究创新点
淫羊藿对小鼠生殖系统尤其是雄性小鼠生殖系统的影响的研究少有报道，而本实验初步研究了这些影响。
本实验丰富了传统中药对于哺乳动物生殖系统的影响的研究。
5. 研究计划与进展
2/25~3/9：计划拟定；3/10~4/19：饲喂小鼠，灌服淫羊藿，解剖检测基本指标，做组织切片、免疫组化、PCR等实验操作，完成各项基础指标的测定；4/20~5/1：数据处理分析，讨论与总结实验，写实验报告。
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