1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
课题意义：泛素蛋白酶体途径是目前已知的所有真核生物体内具有高度选择性的最为重要的蛋白质降解途径。
泛素(ubiquitin, Ub)是一种由 76 个氨基酸组成的小分子蛋白质, 广泛存在于所有真核细胞中,且序列高度保守, 从酵母到人仅相差 3 个氨基酸[1].泛素化是指泛素在一系列酶的催化作用下共价结合到靶蛋白的过程. 泛素化过程通常需要 3 种泛素化酶的协同作用 : E1 泛素激活酶 (ubiquitin-activating enzyme) 、 E2 泛 素 偶 联 酶 (ubiquitin-conjugating enzymes)和 E3 泛素连接酶(ubiquitin-ligase enzymes)。
首先, E1 利用 ATP 提供的能量在泛素 C 端赖氨酸(Lys)残基上的羧基基团与自身的半胱氨酸(Cys)残基上的巯基基团间形成高能硫酯键, 从而活化泛素分子. 然后, 激活的泛素通过硫酯键再被接合到 E2 的 Cys 残基上。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：通过已有的原核表达载体pET32a-CBL构建真核表达载体及BHK细胞真核表达，获得有生物活性的CBL。
研究内容： 真核表达载体的构建，将真核目的基因与表达载体EGFP进行双酶切，酶切后产物经过DNA连接酶连接获得真核表达载体。
3.目的蛋白的表达和纯化，真核表达载体导入到BHK细胞进行目的蛋白的诱导表达，通过超声破碎和蛋白电泳技术获得目的蛋白，并进行进一步纯化。
3. 研究的方法与方案
研究方法：核酸凝胶电泳、核酸胶回收、DNA酶切与连接、普通提质粒与去内毒素大提质粒、转化、转染、蛋白诱导表达、蛋白电泳等技术路线： 1真核表达载体的构建将真核目的基因与表达载体EGFP进行双酶切，酶切后产物经过DNA连接酶连接获得真核表达载体，筛选出阳性克隆并测序，测序。
2.目的蛋白的表达和纯化 将正确的阳性克隆真核表达载体导入到BHK细胞，进行目的蛋白的诱导表达，通过超声破碎和蛋白电泳技术获得目的蛋白，并进行进一步纯化。
实验方案及可行性分析： 本实验采用常规的实验方法，操作难度一般，可熟练掌握。
4. 研究创新点
泛素连接酶CBL是目前国内外的研究热点，通过真核系统表达出有活性的CBL蛋白，为进一步动物实验探究其抗病毒感染的作用奠定基础。
5. 研究计划与进展
第一阶段：2016.92016.10熟悉实验室操作与论文课题，积极查阅相关资料做好充足的技术准备和知识储备。
第二阶段：2016.102016.11完成真核表达载体的构建。
第三阶段：2016.112016.12完成大提真核表达载体，真核表达及蛋白纯化。
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