1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
RNA是生物体重要的遗传物质[1]。
近年来,越来越多的科研结果表明,RNA在生命进程中的作用远不止于此,在2002年度Science评选的10大科学成就中 RNA名列榜首。
RNA分子提取是生物学研究中的一项基本内容,是进行基因表达分析的基础[2]。
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2. 研究的基本内容和问题
通过不同的RNA提取方法,寻找临床检测样本RNA最佳提取方法,提高后续的荧光定量PCR实验的特异性和灵敏度。
3. 研究的方法与方案
1.RNA提取对象:高致病性蓝耳病弱毒活疫苗(JXA1-R株)、猪瘟兔化弱毒疫苗(HLPC)、日本乙型脑炎弱毒活疫苗(SA14-14-2株)。
2.Trizol法:Trizol分别来自Takara公司、北京天恩泽生物技术有限公司和南京天为生物科技有限公司。
在提取组织RNA时,每50~100mg组织用1mL Trizol试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10106个细胞加1mL Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞。
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4. 研究创新点
本研究拟对目前广泛使用的RNA提取方法进行比较,为临床检测病料RNA的最佳提取方法提供重要的依据和实验基础。
5. 研究计划与进展
第一阶段(2016.11.20-2016.11.27):完成试验试剂的采购。
第二阶段(2016.11.28-2016.12.10):完成各种试剂测试,并得出初步结论。
第三阶段(2016.12.10-2016.12.30):探索并改进已有的实验方法。
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