1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
课题意义：猫冠状病毒（feline coronavirus,FCoV）是家猫和野猫体内普遍存在的病原体，分为通常只会引起猫轻微腹泻的肠道冠状病毒（feline enteric coronavirus,FECV）[1]和致死性的猫传染性腹膜炎病毒（feline infectiousperitonitis virus,FIPV）[2]。传染性腹膜炎是发生在猫身上的一类堪称人类癌症的疾病，这种疾病由猫体内的冠状病毒变异而来，猫传染性腹膜炎的病原主要就是猫冠状病毒，该病毒在室温条件下，几小时就会丧失活性，很多消毒剂都有着良好的消灭效果。猫传染性腹膜炎的病毒毒力是非常强的，健康猫一旦患病，在几小时内就会导致死亡，主要发生在幼年猫和青年猫之中，病程可能是突发性（幼猫较常发生）或缓慢且持续数周。初期症状不明显，可能出现食欲减退、精神差、体重下降、持续发烧（39.5～40.6度：黄昏时较高，入夜后会慢慢下降）。通过后续不断的研究和探索，成功实现该病毒的分离，同时在抗体检查方法方面的研究也取得一定程度的进步，对猫传染性腹膜炎疾病也有进一步的认知和了解。FIP的临床症状不仅是腹膜炎、同时也具有极其复杂的临床症状。后期症状会明显分成干湿两型，无论干型或湿型都会造成间歇性发烧、食欲降低等症状。因此对于这种疾病的研究十分有意义，现在也正处于发展中，只有不断研究才能治疗更多动物，现阶段，有很多兽医领域专家学者认为猫传染性腹膜炎，是由猫冠状病毒变异而来的。该病毒在变异成为猫传染性腹膜炎病毒之后，就会复制大量的巨噬细胞，然后脱离了病猫肠道，最终导致了传染性腹膜炎的发生。随着医疗水平的发展，现在已有特效药可以救治，如4415和GC376，但目前并没有准确的治愈率。最新的研究表明核苷类似物GS-441524是一种安全有效的治疗由自然途径感染FIP的药物。最佳剂量为4.0mg/kgSCq24h，持续至少12周，但其并未投入广泛使用针对此种疾病诊断和治疗都具有很大难度的情况下，日常生活中应对猫的生活环境加以重视，并加强对猫群数量控制力度，进而在一定程度上保障猫传染性腹膜炎疾病的感染几率。
国内外研究概况：猫传染性腹膜炎（feline infectious peritonitis,FIP）最常发生于两岁以下的幼猫[3]。临床症状为食欲不振，嗜睡，体重减轻，发热，眼葡萄膜炎和神经症状等[4]。FIP分为渗出型和非渗出型两种，由于渗出型FIP可以检测的指标相对较多，有助于诊断[5]。但是FIP所具有的症状并非是该疾病的特异性症状，不能仅根据病史以及临床症状确诊，需将这些参数以及实验室检查结果相结合进一步做出诊断。临床症状检查渗出型FIP：又称湿性腹膜炎，患病猫腹部膨大，触诊有明显的水样波动；腹水呈粘性，稻草色，透明至中度浑浊[6]。大部分（69％）猫腹腔积液会伴有胸腔炎性渗出[7]；嗜睡，厌食，呼吸困难，黄疸，眼葡萄膜炎，少数出现神经症状。非渗出型FIP：又称为干性腹膜炎，表现为胸腹腔无渗出液，干性腹膜炎的临床症状无特异性，一般包括体温升高、体重减轻、反应迟钝、食欲降低等，部分患病猫出现黄疸、眼内有损伤等，诊断较为复杂。FIP引起的临床症状没有特异性，手术后继发或器官损伤等均可引起胸腹水的产生，而嗜睡，呼吸困难，体温升高，体重减轻等症状也多发于其他疾病，如猫呼吸系统疾病。因此只根据FIP的临床症状难以确诊。血常规检查与生化检测猫感染FIP后常见淋巴细胞减少、轻度至中度再生性贫血和由高球蛋白引起的高蛋白血症[8]。当患猫出现高蛋白血症且血液中血清淀粉样蛋白数值升高，白细胞数上升时，提示体内有明显炎症。但是引起炎症的原因和种类较多，仅根据血常规和生化检测也难以诊断猫是否患有传染性腹膜炎。以下是研究总结的数值可以进行辅助诊断。有研究发现白蛋白与球蛋白的比值（Albumin:Globulin,A:G）可用于辅助诊断FIP，即当这个比值0.4时患FIP的可能性较大，而0.8时患FIP的可能性较小[9]。另一个研究团队在一群健康的猫群中检测发现A:G0.6，他们提出当这一数值0.6时可排除患有FIP，但这一数值0.6却无法说明患有FIP。猫较少发生严重性贫血，在没有肝酶活性升高或严重贫血的情况下，高胆红素血症的存在可增强猫患有FIP的可能性[10]。APP称为急性期蛋白，主要由炎症引起巨噬细胞或者单核细胞释放的一类细胞因子。α1-酸性糖蛋白（acid glycoprotein,AGP）是APP的一种，对其含量的测定有助于FIP的诊断，因为在FIP病例中常出现AGP水平升高（1.5 mg/mL）的现象，因此AGP数值的升高可作为疑患FIP的指标[11]。血常规和生化检测是动物医院常用的检测方法。上述所提到的检测指标适用于大部分感染FIPV的猫，指标异常与临床症状相结合对FIP的诊断起指导的作用，但是确诊则需要多方面的考量。影像学检查对患猫X光检查可见腹部膨大，胸腹腔影像密度增高并呈大面积分布。超声检查患猫在膀胱前方与大肠周围可见大量的无回声区，伴随肝肾指标异常[12]。可通过X光和超声等影像学检查得知患猫胸腹腔是否有积液，同时能够检测肾脏和肝脏是否存在异常，特别是在猫患干性腹膜炎时，若无其他明显症状，可优先使用超声检测肝脏、肾脏来帮助进行FIP的诊断。 Rivalta实验对湿性腹膜炎而言，检测腹水的成分能帮助疾病的诊断，腹水的测试比血液更有价值。FIP腹水通常是透明、粘稠、微黄且富含蛋白质的液体，总蛋白浓度35 g/L（50％球蛋白）。通过Rivalta的实验阳性结果可证明腹水为渗出液。将腹水滴加到8 mL蒸馏水与一滴98%乙酸的混合液中，腹水若在混合液中保持浑浊液滴状沉入底部则为阳性，若腹水形状消失并与混合液融合则提示为阴性。虽然阳性结果无法直接诊断为FIP，但也不失为一种有效的辅助诊断方法。脑脊液检测非渗出型的FIP患猫更容易出现神经症状，其脑脊液可以检测到FIPV，是诊断神经型FIP最有效的方法。但脑脊液会因蛋白质和炎症细胞增多而变得粘稠，使样品的获得存在一定难度，且操作不当易形成脑疝，所以在进行脑脊液采样的时候，要操作规范。对伴有神经症状的猫进行脑脊液分析时，可见蛋白质浓度和白细胞（主要是嗜中性细胞和单核细胞）数量上升。有临床流行病学研究发现：当脑脊液抗体效价大于1:640时可以确认为FIP，但是该结果的价值有限，因为该研究未设立阴性对照。一份研究报告通过健康猫与患有FIP的猫做RT-PCR检测其脑脊液，发现只有患有FIP（部分出现神经系统症状）的猫的脑脊液中能检测到FIPV，而对照猫则无，因此运用RT-PCR的方法检测脑脊液具有100%的特异性[22]。总之，脑脊液的检测对于确诊有很大的帮助，其中运用RT-PCR特异性可以达到100%，脑脊液中检测到抗体也可以作为很好的确诊依据。
实验室检测进展：RT-PCR，患FIP的猫比患FEC的猫更容易向外界排毒。利用RT-PCR的方法，可检测猫粪便、血液、渗出液和各种组织中的病毒核酸，其中腹腔积液和脑脊液样品中FCoV的检测可以帮助FIP的诊断。研究发现，用RT-PCR的方法检测肠系膜、肠淋巴结、肝脏、肾、脾、大网膜等组织样品，除淋巴结外，大多组织的敏感性都很高。与血清相比，使用RT-PCR检测外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）的敏感性更高。2012年的一项研究中，通过对FECV和FIPV氨基酸序列对比，发现在S蛋白的两个氨基酸（M1058L和S1060A）位点出现差异，并证实这两个氨基酸的差异可以在超过95％的病例中将FIPV与FECV区分开来。类似的，2013年有研究发现，FIPV和FECV的S蛋白在弗林蛋白酶切割处有差异。这些为FIP的鉴别诊断提供了新的思路。接着有研究学者想通过S基因来鉴别诊断FIP与FEC，使用FCoV特异性引物对102只猫的组织样品进行逆转录酶定量PCR（RT-qPCR），同时对RT-qPCR阳性样品上的S基因进行测序，结果显示这种方法并不能显著增强检测的灵敏度和特异性。 RT-LAMP T-LAMP（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification）全称为荧光环介导逆转录等温扩增。有研究团队探索这种方法来检测FCoV的存在，通过琼脂糖凝胶和羟基萘酚蓝（hydroxynaphthol blue,HNB）染色来判定，结合RT-PCR以评估灵敏度和特异性。结果显示，样品总体特异性接近100％，但琼脂糖凝胶和HNB的灵敏度分别为50％和54.5％。因此，RT-LAMP似乎是确认病毒存在的很好方法，但不适合用于对阴性样品的排除。这种方法不需要昂贵的设备和复杂的操作，可减少诊断的时间且特异性强（97%），但是该种方法存在灵敏度低（58%）、检测结果有一定误差的缺点。血清抗体检测FCoV感染后机体会产生特异性的抗体，实验性感染最早在7～28天可检测到抗体，因此抗体检测可以在疾病的早期进行。但是患有FIP的猫大约有10％没有血清抗体的产生，在这些猫中，可能是炎症导致血液成分（包括抗体）外渗，因此，无法通过抗体测定法来判定。最近一项研究表明，FCoV病毒血症甚至不能说明FIP，因为测试发现FCoV呈阳性的健康猫在测试的六个月内均未出现FIP或临床疾病，所以从腹水中或者脑脊液中检测到FIPV病毒会比血清中检测到病毒更有助于诊断。总之，目前最常用、有效的检测方法是RT-PCR，结果判定为阳性后结合临床生化血常规检测可以确诊是否感染FCoV，特别是用腹水和脑脊液作为样品所得的阳性结果可以帮助对FIP的诊断。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：研究猫传染性腹泻病毒，找到治愈方法和有效药物
内容：传染性腹膜炎是发生在猫身上的一类堪称人类癌症的疾病，这种疾病由猫体内的冠状病毒变异而来，猫传染性腹膜炎的病原主要就是猫冠状病毒，该病毒在室温条件下，几小时就会丧失活性，很多消毒剂都有着良好的消灭效果。猫传染性腹膜炎的病毒毒力是非常强的，健康猫一旦患病，在几小时内就会导致死亡，主要发生在幼年猫和青年
猫之中，病程可能是突发性或缓慢且持续数周。
3. 研究的方法与方案
研究方法：总结目前临床兽医工作者对猫传腹发病机理和该病的病理变化等的研究成果，根据典型病例等进行归纳总结。同时对猫传腹病例的干湿两型等因素对患猫患病的严重程度进行探究。以期获得系统的诊疗方法。
技术路线与实验方案：通过对猫传腹的致病机理、和病理变化入手研究，概述临床兽医对该病的研究进展。而对猫传腹的致病机理、和病理变化对猫传腹的临床诊断和治疗具有指导意义。再根据自己在南京农业大学动物医院和校外实习单位的临床经验和收集的典型病例对该病的临床诊断和治疗进行归纳总结，以期为猫传腹的临床诊疗提供参考。
4. 研究创新点
特色或创新之处：猫冠状病毒（feline coronavirus,FCoV）是家猫和野猫体内普遍存在的病原体，分为通常只会引起猫轻微腹泻的肠道冠状病毒（feline enteric coronavirus,FECV）和致死性的猫传染性腹膜炎病毒（feline infectiousperitonitis virus,FIPV）。近年来，随着对该病的研究不断深入，涌现出许多新的致病机理发现和新诊疗技术。本论文将以回顾性研究的方式概述对猫传腹致病机理的新研究发现，探明该病的发病机理，这对猫传腹的临床诊疗也具有重要意义。再以病例分析的方式对临床上如何对猫传腹进行诊疗进行归纳分类，将为临床兽医诊疗猫传腹提供参考。
5. 研究计划与进展
研究计划：通过回顾研究猫传腹最新的研究进展，探明该病的发病机理，这对指导猫传腹的临床诊疗也具有重要意义。再根据笔者收集的典型猫传腹病例，进行研究总结，归纳出针对不同类型猫传腹的治疗方案以及治疗过程中常见的问题。
预期进展:目前笔者已对猫传腹的发病机理进行了总结和概述，对治疗该病的保守药物疗法也进行了归纳，预计五月下旬之前就能完成毕业论文的撰写。
以上是毕业论文开题报告，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
