检测经典猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒的rRT-PCR方法的初步建立开题报告

 2023-02-19 20:29:45

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1课题意义

经典猪瘟(classical swine fever,CSF)、猪流行性腹泻(pcine epidemic diarrhea,PED)、猪繁殖与呼吸综合征(pcine reproductiverespiraty syndrome,PRRS)都是在全球养猪国家及地区常见的猪病,三者的致病病原都为有囊膜的单股正链RNA病毒,毒株毒力有强弱之分,致病性常因宿主年龄、免疫状态以及毒株毒力不同而有差异。这三种病都对全球的养猪产业造成了极大的损失。为更好地防范疾病传播流行,养殖场须充分了解各种疾病在本地区的流行情况,及时建立诊断方法,并根据实际情况,构建针对性的防控措施和免疫程序,保障动物健康水平,提高动物身体抵抗力,以降低发病率。三种病原都需要进行实验室诊断才能确诊,最广泛使用的诊断方法是反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)或实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription-polymerase chain reaction, rRT-PCR)。RT-PCR是将RNA的反转录(reverse transcription)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。其中,rRT-PCR较传统的RT-PCR方法具有更高的敏感性和特异性,可同时检测大量样本,极大地提高了检测效率[1]。本课题拟建立同时检测经典猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒以及猪流行性腹泻病毒的rRT-PCR方法,可用于在猪群中快速准确诊断这三种疾病。

2国内外研究概况

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2. 研究的基本内容和问题

研究的目标是初步建立检测PRRSV、PEDV、CSFV的rRT-PCR方法;

研究内容如下:

1.确定靶基因;

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3. 研究的方法与方案

研究方法及技术路线:确定三种病毒的靶基因,选取靶基因中高度保守的一段序列,分别设计特异性引物和探针,检验引物特异性,进行多引物序列分析。

实验方案:

1 rRT-PCR的初步建立

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4. 研究创新点

本课题自行设计引物和探针,旨意为后续建立检测这三种病毒的rRT-PCR方法奠定基础。

5. 研究计划与进展

2020.02-04:文献综述,检测靶基因的选择。

2020.04-05:选择靶基因对应的核酸序列,设计引物和探针。

2020.05-06:撰写毕业论文,毕业答辩。

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