1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是在现代化养鸡过程中比较常见的传染类疾病之一,一旦发病则会给鸡场带来极大地损失。鸡传染性支气管炎易于突变,具有多种血清型,这通常会导致IB的临床预防和控制失败,从而造成严重的经济损失。为了更好地预防和控制家禽生产中的IB,本研究首先通过查找2015年至2020年NCBI发布的23株鸡传染性支气管炎病毒基因序列 ,应用DNAStar软件对获取鸡传染性支气管炎病毒毒株基因进行基因序列对比分析,然后对实验室送检的一份疑是IB感染的病料进行鉴定;另外通过剖检送至南京农业大学动物医学院病理教研组的死鸡10只,为鸡传染性支气管炎的防控提供理论依据。
IBV较高的基因突变率造成了IBV 的血清型复杂,大量的试验表明IBV的血清型达到30多种,并仍有不断上升的趋势,各血清型或毒株之间交叉保护性较弱,从而给本病的防控带来较大的困难,因此对IBV进行实时动态监控和防控成为科学工作者的重要研究方向。目前,虽然表达主要免疫原基因的不同表达系统对IBV都有部分保护作用,但大多数IBV基因工程疫苗免疫保护率比传统IBV疫苗免疫效果偏低,还需进一步研究。
研究表明,IBV的宿主范围已经在逐渐扩大,这种宿主适应性的分子机制还不清楚;IBV的基因与功能之间的相互关系还不完全明白,特别是基因变异对IBV的宿主范围、血清型以及流行病学方面的影响有待更深的研究;传统疫苗一个不容忽视的弱点就是不能区分野毒感染与疫苗免疫,标记疫苗也是IBV未来的研究方向。而IBV 反向遗传操作系统的建立为IBV的进一步研究提供了技术支撑,便于研究者对IBV 基因组结构、基因功能﹑致病机制以及基因工程疫苗等方向的研究。
2. 研究的基本内容和问题
鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus ,IBV)所致的一种急性、高度接触性传染病,是危害世界家禽养殖业的重要疫病之一。它主要损害鸡的呼吸系统,泌尿生殖系统和消化系统。同时,某些菌株可能引起肾脏疾病和其他疾病。鸡传染性支气管炎首先感染呼吸道,然后可能引起肾脏和输卵管感染。鸡在感染后死于呼吸道和肾脏疾病。据报道,病毒组织的向性发生了变化。目前,这种疾病在世界各地盛行。国内外有许多减毒和灭活疫苗,包括呼吸道和肾脏型。但是,世界上有关于IB的连续报道,这意味着鸡传染性支气管炎在世界上仍然很流行,预防鸡传染性支气管炎仍然是一个有待解决的全球性问题。鸡传染性支气管炎在我国各养鸡密集省份及地区呈地方性流行,给我国的养鸡业造成了重大影响和损失。目前鸡传染性支气管炎的技术有①血清学诊断技术。主要包含常规血清中和试验(鸡胚气管环培养观测纤毛运动情况)、琼脂扩散试验、血凝和血凝抑制试验等。血清中和试验用于检测鸡的传染性支气管炎的抗体、抗原和类型;琼脂扩散试验易于检测鸡中的传染性支气管炎抗体,但灵敏度不高,不适用于免疫后抗体的检测;凝结和抗凝试验可用于检测鸡中的传染性支气管炎抗原和抗体。②反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)。RT-PCR技术用于IB诊断将诊断技术提高到基因水平,具有简便、快速和敏感性、特异性强的特点。③核酸探针技术。核酸探针技术敏感度很高。
本研究旨在分析比对2015年至2020年来国内鸡传染性支气管炎病毒的基因序列,并剖检送至南京农业大学动物医学院病理教研组的死鸡10只,为由鸡传染性支气管炎病毒传染的防控提供理论依据。
3. 研究的方法与方案
1. 从NCBI中获取近年来鸡传染性支气管炎病毒毒株基因并进行基因序列对比
2. 对送剖至南京农业大学动物医学病理研究组的10只病鸡进行病料分离及PCR检测
4. 研究创新点
通过借助NBCI中所获病毒株进行序列分析从NCBI中获取近年来国内发现鸡传染性支气管炎病毒毒株,对所获鸡传染性支气管炎病毒毒株进行全基因和穗糖蛋白(S1)基因序列比对然后通过DANSstar进行基因进化树对比,分析它们的核苷酸同源性;再通过临床剖检和PCR鉴定送剖至南京农业大学动物医学病理研究组的10只病鸡样本,根据实验检测结果分析其发病原因,与国内流行鸡传染性支气管炎亲缘关系。为防控该病提供可靠的理论依据。
5. 研究计划与进展
3月12-5月9日查阅相关资料完成论文中文献综述部分
5月9日-5月20日完成送检样本的病料分离及PCR鉴定
5月10日-5月20完成2015年-2020年鸡传染性支气管炎病毒的序列比对并构建其基因进化树
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