1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
Wt-1与Cx43作为精子正常发生过程中的关键因子，研究它们在支持细胞中的相互作机制有利于进一步了解精子发生的机理。
进行此项研究，有两个方面的意义。
其一，近年来，由于社会竞争压力的增大以及生活环境的恶化，不孕不育症的发病率已呈明显的上升趋势。
3. 研究的方法与方案
1、研究方法：细胞培养、细胞转染、western blot、RT-PCR2、技术路线： →Western blot小鼠支持细胞的分离培养→wt-1过表达质粒与siRNA转染 →鉴定wt-1的信号通路与cx43的关联性 →RT-PCR 3、实验方案：3.1细胞的分离：1)将5日龄的雄性小鼠埋于冰中，头部朝下；2)在超净台中铺层一次性手套，将小鼠仰面致其上，用酒精棉球消毒腹部，镊子夹起腹部皮肤，水平剪开切口，撕开腹部皮肤，取出睾丸，减掉附睾及脂肪后立即放入含有预冷的D-Hanks平面皿里；3)将睾丸用尖头镊夹住，用镊子在一次性手套上轻轻剪碎睾丸包膜，放入另一有预冷的D-Hanks平面皿里，洗一下，放入500μl D-Hanks的EP管中，剪碎睾丸；4)拿出分装好的3.5ml和500μl的胶原酶，将样品转移到含3.5ml胶原酶的离心管中，并用500ml胶原酶清洗一下残留样品，一并加入。
补加500μl D-hanks至5ml；5)37℃水浴，手摇12分钟并注意防止沉淀沉入管底；6)300g离心5分钟；7)离心结束后，吸出胶原酶，补加D-Hanks至5ml，300g离心5分钟，重复一次；8)吸出D-Hanks，加D-Hanks胰酶至5ml，轻轻吹打，37℃水浴锅中手摇5分钟；9)向离心管中加500μl FBS终止消化，吸出粘性成团的组织，300g离心5分钟，去上清；10)加适量培养液吹打混匀，铺到细胞培养板上培养；11)将细胞培养板置于CO2培养箱中，5% CO2，37℃静置培养。
3.2细胞转染1）准备24孔板，利用其中6孔每一列为一组，分别用来培养WT-1过表达、siRNA、WT（野生型）的细胞2)接种细胞至70-90%汇合度时转染；3)使用25μl Opti-MEM培养基稀释0.75μ1 Lipofectamine3000，用振荡器震荡3秒，使其充分混匀，静置5分钟；4)使用25μ1 Opti-MEM培养基稀释DNA，制备DNA预混液，用振荡器震荡3秒使其充分混匀；5)在每管已稀释的Lipofectamine3000试剂中加入DNA预混液(1:1比例)，用手指弹匀，静置10分钟；6)从孔中吸出等体积的培养液，然后将Lipofectamine3000 siRNA混合物加入细胞中；7)37℃孵育细胞48小时，然后分析转染细胞。
4. 研究创新点
本实验的特色之处在于研究精子正常发生过程中的两个关键因子：WT-1与Cx43之间的联系及它们共同作用对精子的生成过程产生的影响，或许可以为雄性不育提供新的治疗思路。
5. 研究计划与进展
2017年11月至2018年12月（1）完成实验动物小鼠其它试剂准备工作2018年12月至2018年1月（1）完成小鼠支持细胞的分离、细胞培养及细胞转染实验工作2018年1月至2018年4月（1）收集细胞样品进行western blot 实验（2）收集细胞样品进行RT-PCR 实验2018年4月至2018年5月（1）完成数据统计，撰写毕业论文
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