1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述1.1 研究背景人乳寡糖(human milk oligosaccharides,HMO)是母乳中非常独特的一类寡糖,大多由3~6个糖基组成,迄今已发现200多种;HMO是母乳中含量第3的固形物(仅次于乳糖和脂肪),初乳中HMO含量为20~25g/L,成熟母乳中含量为10~15g/L[1-4]。
其中,2'-FL是含量最多的一种HMO,可占母乳中HMO含量的30%。
动物性乳液则不含此类物质。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
2.1研究内容为了建立生物法制备2′-FL工业化生产工艺,对JM109大肠杆菌菌株进行基因组编辑,利用α-1,2-岩藻糖转移酶,乳糖与鸟苷5′-二磷酸(GDP)-L-岩藻糖发生酶促岩藻糖基化反应,使之高效生产2′-FL,并对生产工艺进行了优化,主要包括对重组菌株的摇瓶发酵、7.5L发酵罐补料发酵等技术手段(包括培养条件及工艺参数优化等)的研究,以改良生产工艺为主要目的,达到提高2′-FL质量及产量、降低生产成本、提高生产效率、扩大经济效益的目标。
本课题主要研究内容是:1. 大肠杆菌JM109菌株摇瓶发酵生产2'-FL的基本工艺;2. 大肠杆菌JM109菌株在7.5L发酵罐补料发酵生产2'-FL的基本工艺;3. 以上工艺的参数优化工作。
2.2研究流程2.2.1实验材料2.2.1.1重组实验菌株本实验室自主立构建重组大肠杆菌JM109(DE3) pETDuet/pACYCDuet/pCOLADuet菌株,实验前分别以平板和甘油管的形式储存于 4℃和-70℃冰箱中。
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