1. 研究目的与意义
毕业论文的内容：针对苍耳中活性成分及其衍生物的抗炎作用进行药效学实验，该实验分为两部分进行，第一部分为通过对LPS诱导RAW264.7细胞释放NO抑制试验，计算出NO释放抑制率，半抑制率（IC50），细胞增殖抑制率，评价苍耳中活性成分及其衍生物对巨噬细胞毒性及体外活性的影响。
第二部分为药物对二甲苯致小鼠耳肿胀试验，计算出肿胀度，初步评价苍耳中活性成分及其衍生物的体内抗炎活性。
本实验通过体外体内抗炎试验，对苍耳中活性成分及其衍生物进行抗炎活性评价。
2. 文献综述
巨噬细胞与炎症【摘要】 巨噬细胞主要参与构成机体固有免疫体系,在炎症的发生发展中有着重要作用 巨噬细胞能够吞噬并杀伤病原微生物，呈递抗原，分泌细胞因子等作用，本文着重讲述巨噬细胞在炎症的作用以及发挥炎症反应的途径，并且简要阐述了环氧化酶以及NO炎症介质在炎症反应中的作用。
【关键词】炎症；巨噬细胞；环氧化酶；NO巨噬细胞是俄国免疫学家Mechnikov于1908年发现的，是机体内一种重要的免疫细胞，它是由血液中单核细胞进入结缔组织后，体积逐渐増大，细胞质内溶酶体不断增多，吞噬功能也随之増强，并逐渐分化为巨噬细胞，并广泛分布在全身血液中，它的存活时间一般是２个月或更长[8]。
巨噬细胞具有抗炎、抗肿瘤、机体免疫调节等重要的生理作用，此外，巨噬细胞又是介导炎症介质产生的＂心脏＂细胞，大量的研究已表明多种炎症性疾病的发生与发展与巨噬细胞及其释放的炎症介质有密切的联系。
3. 设计方案和技术路线
研究方案：一、 对LPS诱导RAW264.7细胞释放NO抑制试验细胞: 小鼠RAW264. 7 巨噬细胞试剂: 阳性药吲哚美辛、供试药、青链霉素混合液、胰蛋白酶－ EDTA 消化液、胎牛血清、MTT、脂多糖、1640培养基、NO 检测试剂盒等实验器材：细胞培养箱、酶标仪等方法: 1.NO的测定： 取对数生长期的RAW264.7细胞，以2105cell/ml接种于96孔板（每孔200ul混悬液），培育4h待细胞贴壁后，将上清液换为加药培养基（化合物终浓度分别为100、10、1、0.1uM，阳性药吲哚美辛50uM），培养4h后，除空白对照组外各组加入LPS刺激（终浓度为5ug/ml），继续培养20h，取50ul上清液加入到96孔板中，按照NO试剂盒方法操作，于540nm测定各孔吸光度，计算NO释放抑制率（%）=（LPS组OD值-药物组OD值）/(LPS组OD值-空白组OD值)100%，再利用Graphpad软件计算IC50值。
2.MTT 法检测细胞活力检测：将对数生长期的RAW264.7 细胞以2105cell/ml接种于96 孔培养板中（每孔200ul混悬液），培育4h待细胞贴壁后，将上清液换为加药培养基（化合物终浓度分别为100、10、1、0.1uM，阳性药吲哚美辛50uM）继续培养24h，48h和72h，加入MTT20μl，继续培养4h，弃去上清，吸干残留液体，各孔加入DMSO150ul，使充分溶解后立即在570nm下检测各孔吸光度，取平均值，计算细胞抑制率（%）=1-药物组OD值/LPS组OD值。
二、 二甲苯致小鼠耳肿胀实验实验动物：ICR小鼠90只（购自南京市青龙山动物繁殖场），雄性18~22g药品：阳性药吲哚美辛、供试药、0.5%CMC钠水溶液、二甲苯实验器材：直径9mm打孔器等方法：小鼠90只，随机分为9组，每组10只。
4. 工作计划
1.5-2.28 查阅并整理文献资料3.1-3.8完成开题报告3.9-5.31 进行课题实验6.1-6.7完成毕业论文设计
5. 难点与创新点
1.以中医药理论为指导，从中药中寻找新型化合物，为新型化合物的开发和利用奠定基础，推动中药化学的发展和中药现代化。
2.以苍耳草的抗炎作用为切入点，对苍耳草中活性成分进行化学修饰，得到一系列衍生物，通过LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7体外炎症模型和二甲苯致小鼠耳肿胀体内炎症模型的抗炎实验进行化合物筛选，以期寻找新型的抗炎化合物。
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