1. 研究目的与意义
【研究内容】1. 探究莪术醇在LSEC介导的肝纤维化血管生成过程中的作用（1）分离大鼠原代LSEC体外培养，给予不同浓度VEGF-A后检测1）LSEC血管生成标志物的表达；2）促血管生成信号分子的表达；3）调控基底膜降解与重构标志物的表达；4）基质胶生成实验检测LSEC血管生成能力。
（2）大鼠原代LSEC用VEGF-A处理24h 后,给予不同剂量Curcumol后，分别检测：1）促血管生成信号分子的表达；2）调控基底膜降解与重构标志物的表达；3）基质胶生成实验检测LSEC血管生成能力。
2、探究莪术醇抑制LSEC血管新生的分子机制（1）分离大鼠原代LSEC用VEGF-A处理24h后,给予不同剂量Curcumol后，分别检测1）HiF-1α蛋白以及mRNA水平变化； 2) 蛋白翻译抑制剂处理后细胞中HiF-1α蛋白泛素化水平；3）去泛素化酶USP19表达水平。
2. 文献综述
肝血窦与肝脏疾病研究进展尤仕淇1，郑仕中1，2，3，41.南京中医药大学药学院，南京 210023；2.江苏省中药药效与安全性评价重点实验室，南京 210023；3.江苏省中药功效物质重点实验室，南京 210023；4.中药品质与效能国家重点实验室（培育），南京 210023摘要：肝血窦直接参与肝脏微循环的终末端血液供给，为肝脏组织细胞与血液进行物质交换提供通道，是人体肝脏中最重要的生理结构单位。
当慢性肝脏疾病发生时，肝血窦内皮细胞发生毛细血管化，肝窦壁中的肝星状细胞受到损伤因子的诱导而收缩，引发肝血窦形态与功能的改变，进而导致肝脏微循环受阻，门静脉压力升高。
肝脏组织在处于缺氧的状况下诱发肝窦细胞病理性血管生成，进一步加重肝脏慢性疾病的发展。
3. 设计方案和技术路线
【研究方案】1. 探究莪术醇在LSEC介导的肝纤维化血管生成过程中的作用（1）分离大鼠原代LSEC体外培养，给予VEGF-A不同浓度20、40、80ng/ml检测1）LSEC标志物CD31、CD34及vWF的表达；2）促血管生成信号分子VEGF-R2、PDGF及Angiopoietin的表达；3）调控基底膜降解与重构的MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达；4）基质胶生成实验。
（2）大鼠原代LSEC用40ng/ml VEGF-A处理24h后,给予不同剂量Curcumol10、20、40μM后，分别检测：1）促血管生成信号分子VEGF-R2、PDGF 及Angiopoietin的表达；2）调控基底膜降解与重构的MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达；3）基质胶生成实验。
2、探究莪术醇抑制LSEC血管新生的分子机制（1）分离大鼠原代LSEC用40ng/ml VEGF-A处理24h后,给予不同剂量Curcumol10、20、40μM后，分别检测1）HiF-1α蛋白以及mRNA水平变化； 2) 蛋白翻译抑制剂处理后细胞中HiF-1α蛋白泛素化水平；3）去泛素化酶USP19表达水平。
4. 工作计划
2022年02月-2022年03月分离大鼠原代LSEC体外培养，筛选莪术醇给药浓度。
2022年03月-2022年04月检测不同剂量的VEGF对LSEC血管生成的影响，选取中剂量VEGF诱导LSEC血管生成后给予不同剂量莪术醇，检测其对LSEC对血管生成的影响。
2022年04月-2022年05月检测不同剂量HIF1α抑制剂对LSEC血管生成的影响。
5. 难点与创新点
1.中药活性成分莪术醇能够影响肝窦内皮细胞血管生成2.莪术醇通过调控缺氧诱导因子（HIF1α）表达含量介导肝窦内皮细胞血管生成
