Caffeoyl Shikimate Esterase Like基因在棉花转基因材料中的表达验证开题报告

 2023-02-14 09:37:23

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

棉花是锦葵科(Malvaceae),棉属(Gossypium)双子叶植物,一般是一年生的亚灌木[1]。

棉花是世界上是主要农作物之一,它不仅是纤维作物、油料作物、粮食作物,还是一种蜜源植物,更是纺织、化工和医药等产业的原料。

棉花的主要成分是纤维,纤维的品质构成要素有纤维细度、长度、强度、整齐度等[2]。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:研究棉花中Caffeoyl Shikimate Esterase Like(CSEL)基因的功能研究内容:研究Caffeoyl Shikimate Esterase Like(CSEL)基因在棉花植株中同一组织不同时期的表达差异。

拟解决的关键问题:筛选出纯合株系,分析出转CSEL基因植株与受体之间的表达差异。

3. 研究的方法与方案

研究方法:利用农杆菌介导转化法获得三个载体的转基因植株,利用卡那检测进行初筛,将阳性株系按克隆种植,对转基因植株进行分子检测和基因表达检测,对比表型数据研究CSEL基因的功能。

技术路线:实验方案:(1)农杆菌介导转化法:利用农杆菌介导转化法,通过组织培养得到三个载体的转基因植株(2)卡那霉素抗性对转基因植株进行筛选及PCR鉴定(3)转基因植株的江浦种植:将经卡那霉素筛选的阳性株系按每个克隆5-10行重复种植于江浦实验田;做自交留种(4)转基因植株的分子检测:PCR检测、Southern blot (5)转基因植株的基因表达检测:RNA提取、反转、Q-PCR(6)转基因后期表型调查,纤维品质鉴定等可行性分析:(1)本实验室通过基因芯片筛选,获得了一个与棉纤维发育相关的编码339个氨基酸的cDNA克隆,称其为Caffeoyl shikimate esterase Like(CSEL)。

实验室已经利用农杆菌介导转化法,通过组织培养得到转基因植株,并且多代连续自交后,已获得纯系。

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4. 研究创新点

CSEL基因是本实验室通过基因芯片筛选,得到的一个与棉纤维发育相关的编码339个氨基酸的cDNA克隆,本项目检测正义载体和反义载体转基因植株与受体之间的差异,通过过量表达和抑制表达并结合表型分析研究该基因的功能。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展:2015.04-2015.05 播种、移苗2015.05-2015.07 田间卡那检测、取叶片提取DNA2015.08-2015.11 自交、按单株收5、8、10DPA自交纤维、同时收非自交纤维2015.11-2015.01 分子检测、纤维表型分析2015.01-2016.02 基因表达检测、纤维表型分析2016.03-2016.05 数据分析处理与论文撰写

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