1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
假单胞菌（Pseudomonas protegens）Pf-5菌株，先前命名为荧光假单胞菌（P. fluorescens ）Pf-5。该菌株分离自棉花根际土壤，对卵菌、真菌和细菌等引起的植物病害具有较好的防治效果。Pf-5菌株全基因组已知，能遗传操作，是研究生防假单胞菌的模式菌株[1]。Pf-5菌株能通过非核糖体途径合成多种活性物质[2],这些物质在其防治植物病害中起着重要作用。
植物线虫是引起植物病害的重要病原生物。线虫是一类两侧对称原体腔无脊椎动物，其种类繁多，生活环境复杂。植物线虫寄生在植物体内，危害其寄主植物，引起植物病害，造成作物产量损失或产品的质量变劣，使农业产品经济效益减少，其中以植物根结线虫和植物孢囊线虫对农作物的危害最甚，分布范围也最广。在本着预防为主，综合防治的植保方针下，对线虫的防治方法有植物检疫、化学防治、农业措施防治、物理防治和生物防治等。目前应用最广泛的是化学防治，由于高毒杀线剂的使用，产生了环境污染和增强了线虫抗药性等诸多问题，化学杀线剂的应用受到一定的限制。随着人类环保意识的提高，生物防治将成为线虫防治的主导。线虫生物防治的研究具有广阔而深远的发展空间。
目前，通过科学研究和试验，人们已经分离培养了许多应用于植物病害防治的微生物，生防假单胞菌（Pseudomonas spp.）作为植物根围促生细菌（plant growth promoting rhizobacteria, PGPR）研究领域的典型代表，这类细菌具有高效利用种子和根系渗出物，快速生长繁殖，有效定殖在植物根际，产生多类活性代谢物质等优点[3]。Pf-5菌株合成多种活性物质，这些物质在其防治植物病害中起着重要作用。已有研究结果表明，来自南极土壤的恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）1A00316菌株在离体和活体中均对南方根结线虫表现出较好的抗性，其生防效果达到71.67%[4]。Pf-5菌株基因知道合成的活性物质具有抑制细菌、真菌和卵菌活性，还能作为激发子诱导植物产生系统抗性（Induced systemic resistance，ISR) [5，6]。除此之外，近来的研究结果表明pf-5含有杀螟虫幼虫活性相关基因簇Fit[7]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：
研究生防假单胞菌Pf-5菌株的Fit基因簇是否与其杀线虫活性相关，并阐明作用机理。
研究内容：
3. 研究的方法与方案
研究方法：
本实验以假单胞菌 Pf-5 菌株中Fit 基因簇中的Fit D基因为研究对象，鉴定FitD蛋白的杀虫活性，并研究其作用机理。围绕这个目标，将采用基因重组、PCR扩增技术、荧光蛋白标记技术等。技术路线：
见附件
4. 研究创新点
本项目以生防假单胞菌 Pf-5 菌株中的Fit基因簇为研究对象，研究该基因簇中的FitD蛋白的杀虫活性，阐明作用机理。
5. 研究计划与进展
研究计划：
2016.11-2016.12
查阅资料文献，制定研究计划及相关技术路线，获得中假单胞菌中Fit基因簇的序列信息。
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